冰凍切片的原理及其優(yōu)缺點

冰凍切片是將新鮮樣品立即在液態(tài)氮或其他制冷劑中直接冰凍或者經(jīng)化學固定后的樣品再冰凍，置于低溫下迅速凍結(jié)達到一定的硬度后直接進行切片的一種方法。目前，冰凍切片主要用于臨床病理快速診斷和部分形態(tài)學研究性工作中。

了解冰凍切片的原理可以更好地運用在臨床病理取材中，也便于在臨床教學中更好地學習與實踐。本文就冰凍切片的原理和其優(yōu)缺點進行簡單的闡述。

冰凍切片的原理

組織經(jīng)過冷凍后，其內(nèi)的水分結(jié)冰，起到了包埋劑的作用，使組織變硬，有利于切成薄片。其過程比較簡單，無需經(jīng)過脫水和透明步驟，組織經(jīng)固定或不固定都可切片，一般亦可切成幾微米的薄片。由于組織不經(jīng)溶劑處理，不受試劑的強烈刺激及溫度的影響，所以組織沒有顯著的收縮，細胞形態(tài)沒有大的改變，脂肪和類脂也能較好保存。這樣，冰凍切片除了對外科手術中的快速診斷十分有意義外，在組織化學、免疫組織化學、免疫定位、原位雜交、酶定位及植物微管研究中也被廣泛地應用。

和其他幾種切片方法相比，冰凍切片有著*的*性，但也有一定的局限性。

優(yōu)點

1)簡便，快速，用時短。在臨床上，手術的摘出物需急速診斷時，用此法從采取標本到切片制成，可以在15min之內(nèi)完成。切片前可以不需要對組織固定、脫水、透明、包埋等手續(xù)即可進行切片，減少了一些中間環(huán)節(jié)。

2)組織變化不大。能較好地保存脂肪、類脂等成分；在免疫組織化學研究中有利于組織抗原性的保存；有些研究為了保存某些酶的活性也需要采用此法。特別是對于那些對有機溶劑或熱的溫度耐受能力較差的細胞膜表面抗原和水解酶保存較好。

缺點

1)不容易做連續(xù)切片和較薄的切片。

2)組織塊在凍結(jié)過程中產(chǎn)生的冰晶影響細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及抗原物質(zhì)的定位。組織結(jié)構(gòu)不如石蠟切片好，切片較厚、不易得到很好的連續(xù)切片，且操作時容易破碎(易破碎的樣品在冰凍前可用10％明膠或2％瓊脂糖包埋)。由于組織內(nèi)的水份起到包埋劑的作用，在組織冰凍的過程中，一旦冰晶的核心形成，它們就逐漸膨脹，并破壞所有圍繞它們的細胞器。當冰凍的組織切片貼到玻片上時，冰晶融化，在組織上留下許多孔狀的空隙。由于水在-4℃時體積大，組織內(nèi)形成冰晶的數(shù)量則與組織冷凍的速度成反比，因此，要盡量避免緩慢的冷卻。使組織的溫度迅速降到-4℃以下，而且送檢做冰凍切片的組織應盡可能地新鮮和避免過度的潮濕。用濕的鹽水紗布包裹組織會使切片出現(xiàn)嚴重的人為假像及大量的冰晶孔隙，不僅造成診斷的困難，也使各種特殊要求的染色難以進行。

在臨床實踐中，結(jié)合需要，選擇合適的切片方法，提高診斷的準確性顯得尤為重要。