徠卡高壓冷凍儀的這些知識(shí)值得我們學(xué)習(xí)

　　冷凍電鏡技術(shù)簡(jiǎn)化，并將其應(yīng)用在生物分子成像方向，打破了長(zhǎng)期以來(lái)解析蛋白必須依靠傳統(tǒng)X射線晶體學(xué)（X-raycrystallography），核磁共振(NMR)的手段，使我們?cè)诮趦?nèi)很有可能獲得原子級(jí)別分辨率下的生命復(fù)雜機(jī)制的詳細(xì)圖像。

 

　　徠卡高壓冷凍儀是通過(guò)液氮制冷，通過(guò)空氣壓縮機(jī)提供壓力來(lái)源，通過(guò)物理原理可使局部壓強(qiáng)達(dá)到2100拔，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)含水樣本的高壓冷凍固定, 冷凍固定后樣品經(jīng)后續(xù)處理（冷凍替代/常溫超薄切片，冷凍超薄切片或冷凍斷裂等）供電子顯微鏡觀測(cè)。能在毫秒級(jí)別內(nèi)大程度地保存樣品生活狀態(tài)的原始真實(shí)信息，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、酶/抗原活性無(wú)變化，可溶性離子及小分子得到有效固定等等，有效避免了常規(guī)化學(xué)固定帶來(lái)的假象。除了可以結(jié)合冷凍切片，完成CEMOVIS的工作外，它還可以結(jié)合冷凍斷裂，冷凍替代等來(lái)觀察樣品的內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)或進(jìn)行免疫學(xué)的相關(guān)工作。除此之外，它還可以結(jié)合光刺激和電刺激，為神經(jīng)生理學(xué)家打開(kāi)了一扇新的大門(mén)。

 

　　徠卡高壓冷凍儀的制備程序可為兩類(lèi)：

　　1.無(wú)溶液制備法：包括取材、快速冷蹤、冷凍替代、切片、干燥、染色或不染色、鏡檢等幾個(gè)步驟。主要用于可溶性物質(zhì)的放射白顯影和X射線微區(qū)分析。

　　2.固定樣品制備法：包括取材、樣品包埋或不包埋、冷凍保護(hù)處IR、快速冷凍切片、染包及鏡檢等步驟。適用于進(jìn)行形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)研究。

 

　　徠卡高壓冷凍儀的主要技術(shù)路線是： 通過(guò)冷凍制樣技術(shù)（高壓冷凍，保存樣品原始的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)信息），制備得到冷凍超薄切片（或通過(guò)投入冷凍技術(shù)冷凍樣品），之后借助冷凍光鏡觀察熒光標(biāo)記位置，記錄感興趣的位置，然后在冷凍TEM中實(shí)現(xiàn)原位電鏡觀察，從而實(shí)現(xiàn)光鏡電鏡聯(lián)用技術(shù)。