二氧化碳培養(yǎng)箱正確使用方法及日常維護保養(yǎng)

二氧化碳培養(yǎng)箱為細胞生長提供了理想的生長環(huán)境，細胞在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)數(shù)月甚至數(shù)年，如果培養(yǎng)不當導致細胞死亡可能造成極大的科研成果損失。培養(yǎng)箱本身性能的穩(wěn)定和可靠性固然重要，另外，正確的使用方法和日常保養(yǎng)對實驗結果也是至關重要。

今天為大家介紹減少實驗室細胞污染的三種途徑：

1.正確的使用培訓；

2.持續(xù)的日常保養(yǎng)；

3.適當?shù)臄[放位置。

正確的使用培訓

實驗室內(nèi)往往眾多實驗人員共用一臺培養(yǎng)箱，難免有人為操作失誤，都會增大交叉污染的風險，因此應對所有實驗人員進行培養(yǎng)箱的使用培訓。需要注意以下幾點：

設備使用培訓

使用培養(yǎng)箱前必須著個人防護裝備，按照實驗室生物安全等級要求實施實驗室管理規(guī)范、無菌操作方法、標準操作流程（SOP）。

實驗服袖口需扎進手套內(nèi)（如圖A），未扎進的袖口可能接觸到潔凈的培養(yǎng)基，會增加交叉污染的風險（如圖B），另外裸露皮膚上的可能潛在的污染源也會增加交叉污染的風險（如圖C）；

手套使用前用70%常用消毒劑消毒；

培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)盤、培養(yǎng)皿等在放入培養(yǎng)箱前需做好標記；

從箱子后部依次往前擺放培養(yǎng)基，以免最早放置的被過多干擾。

近期需要取出的材料放至靠近箱門處并做好標記；

帶蓋的長頸瓶應遠離箱門以避免交叉污染；

避免堆疊太多培養(yǎng)基；

避免干擾細胞生長盡量少開箱門。

人員操作培訓

建立完善的實驗室管理規(guī)范；

新進實驗員應建立培訓流程；

實驗室內(nèi)應定期或不間斷進行操作培訓；

做好詳盡的文件記錄，文件記錄不僅單純的記錄實驗室事件，對設備定期維護、實驗數(shù)據(jù)查找都能起到很好的提示和記錄，比如提示每周檢查過濾器、記錄開門頻率對細胞生長的影響。

持續(xù)的日常維護保養(yǎng)

培養(yǎng)箱日常維護保養(yǎng)對其性能的保障非常重要，甚至比操作技術失誤對實驗結果的影響更大。做好培養(yǎng)箱的日常維護不僅減少對實驗結果的影響更能延長培養(yǎng)箱的使用壽命，降低實驗室成本。

完善的文件管理

廠商提供的操作維護說明書是很好的參考文件，會列舉日常使用及保養(yǎng)需注意的要點，可以作為實驗室培養(yǎng)箱維護文件的參考。制定維護保養(yǎng)文件時需全面考慮培養(yǎng)箱使用頻率、實驗室環(huán)境潔凈度、使用人員的數(shù)量、以及培養(yǎng)細胞的類型等，綜合各方面情況列出合理的方案。

箱體的定期清潔

培養(yǎng)箱內(nèi)外部的定期清潔頻率取決于培養(yǎng)細胞的類型和實驗室環(huán)境。

外部清潔必須定期去除灰塵及長期附著在表面的污染物，這些污染物在開門時很可能隨空氣流動潛入箱體內(nèi)。培養(yǎng)量大的實驗室建議每周清潔一次，培養(yǎng)量小的實驗室建議每月清潔一次。使用較溫和的家用清潔劑或蒸餾水清潔即可。

不銹鋼內(nèi)膽建議每月清潔一到兩次，圓角的設計（圖D）可以減少污染物的產(chǎn)生，可使用70%異丙醇、酒精或其它無腐蝕性的消毒劑擦拭，切記不可使用鹵素類消毒劑（次氯酸、漂白粉）。門口墊圈處（圖E）很易滋生污染物，需注意加強清潔，或拆下進行高溫滅菌。

水盤的清潔

水盤的清潔和換水是培養(yǎng)箱日常維護很重要的項目，至少一周需清潔一次，頻繁加水以保障飽和濕度。水盤加水使用蒸餾水或去離子水，可以加少劑量的硫酸銅溶液抑制污染物。

防止干燥

如果培養(yǎng)環(huán)境濕度不足，培養(yǎng)基中的水分會蒸發(fā)造成環(huán)境干燥影響細胞生長。至少每周加一次水對保持培養(yǎng)箱濕度非常重要。

污染風險降低

細菌、霉菌、病毒或支原體污染是細胞生長最大的威脅?，F(xiàn)代的培養(yǎng)箱的設計和特點可以適當減少污染發(fā)生。

HEPA過濾器

閉環(huán)HEPA過濾器是減少污染發(fā)生的一個重要設計。HEPA過濾器持續(xù)提供箱內(nèi)潔凈的空氣。但為保證HEPA過濾的有效性，HEPA需要定期更換，每周或每兩周應定期檢查過濾器。進氣過濾器（圖F）的壽命一般在3-6個月。NuAire建議供氣過濾器（圖G）每使用5瓶氣或已變黃時更換一次，大的囊性過濾器（圖H）每兩年需更換一次。

配備HEPA過濾器的培養(yǎng)箱類似一個微型潔凈間，箱內(nèi)持續(xù)過濾的空氣使箱體空氣潔凈度達到百級。每一次開箱門都可能造成污染物的侵襲，NuAire培養(yǎng)箱每20分鐘換氣一次，使污染物快速被過濾，箱體內(nèi)空氣潔凈度達ISO 5級。

循環(huán)滅菌

一些實驗室潛在病原微生物如HIV病毒，需要145℃干熱循環(huán)滅菌才能有效滅殺。145℃滅菌程序需要持續(xù)8-14小時，可選擇在夜間運行。NuAire培養(yǎng)箱的層架和內(nèi)部五金件耐受145℃滅菌，無需滅菌前取出，節(jié)約了滅菌時間。

145℃滅菌需要按照實驗室SOP根據(jù)實際需要運行，并且不能代替日常的清潔保養(yǎng)。

放置適當位置

培養(yǎng)箱需要放置在實驗室內(nèi)合適的位置：需遠離走廊，環(huán)境溫度需穩(wěn)定，遠離水源，遠離通氣設備以免空氣污染，遠離窗口避免陽光直射，遠離其它熱源如高壓蒸汽滅菌器，以及離電源近的位置。